核酸模板在核酸聚合酶、引物、四種單脫氧核苷酸存在條件下復(fù)制或轉(zhuǎn)錄時(shí)，如果在四管反應(yīng)系統(tǒng)中分別按比例引入四種雙脫氧核苷酸，只要雙脫氧核苷酸摻入鏈端，該鏈就停止延長，鏈端摻入單脫氧核苷酸的片段可繼續(xù)延長。如此每管反應(yīng)體系中便合成以共同引物為5’端，以雙脫氧核苷酸為3’端的一系列長度不等的核酸片段。反應(yīng)終止后，分四個(gè)泳道進(jìn)行電泳。以分離長短不一的核酸片段（長度相鄰者僅差一個(gè)核苷酸），根據(jù)片段3’端的雙脫氧核苷酸，便可依次閱讀合成片段的核苷酸排列順序。