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    逆轉(zhuǎn)錄pcr的原理及主要過程

    回答
    愛揚教育

    2022-01-24

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    RT—PCR 為反轉(zhuǎn)錄RCR和實時PCR共同的縮寫。逆轉(zhuǎn)錄PCR,或者稱反轉(zhuǎn)錄PCR,是聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)的一種廣泛應(yīng)用的變形。在RT—PCR中,一條RNA鏈被逆轉(zhuǎn)錄成為互補DNA,再以此為模板通過PCR進行DNA擴增。

    擴展資料

      步驟:預(yù)變性:

      破壞DNA中可能存在的較難破壞的二級結(jié)構(gòu)。使DNA充分變性,減少DNA 復(fù)雜結(jié)構(gòu)對擴增的影響,以利于引物更好的和模板結(jié)合,特別是對于基因組來源的DNA模板,最好不要吝嗇這個步驟。此外,在一些使用熱啟動Taq酶的反應(yīng)中,還可激活Taq酶,從而使PCR反應(yīng)得以順利進行。

      變性——退火——延伸循環(huán):

      模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)作準備;

      模板DNA與引物的退火(復(fù)性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合;

      引物的延伸:DNA模板——引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應(yīng)原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復(fù)制原理,合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留復(fù)制鏈。(三)PCR儀擴增循環(huán)后72度延伸10分鐘。