以無菌操作在培養(yǎng)基表面直接垂直放上牛津杯（內徑6mm、外徑8mm、高10 mm的圓形小管，管的兩端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），輕輕加壓，使其與培養(yǎng)基接觸無空隙，在杯中加入待檢樣品（發(fā)酵液），牛津杯一般可以裝240微升,勿使其外溢。加滿后置37℃培養(yǎng)16-18小時，觀察結果，抑菌圈用尺直接量就可以。在培養(yǎng)中,一方面試驗菌開始生長，另一方面抗生素呈球面擴散，離杯越近，抗生素濃度越大，離杯越遠抗生素濃度越小。隨著抗生素濃度減小，有一條最低抑菌濃度帶，在帶范圍內，菌不能生長，而呈透明的圓圈，這就叫“抑菌圈”。抗生素濃度越高，抑菌圈越大。

　　抑菌圈是福萊明發(fā)現(xiàn)青霉素的過程中，提出的一個詞匯。青霉的培養(yǎng)皿的周圍是一個以青霉菌落為圓心的一個規(guī)則的圓，不生長細菌,而在遠離青霉的地方有細菌生長。不生長細菌的地方，這個圓圈被福萊明稱為抑菌圈。

　　抑菌圈法又叫擴散法，是利用待測藥物在瓊脂平板中擴散使其周圍的細菌生長受到抑制而形成透明圈，即抑菌圈，根據(jù)抑菌圈大小判定待測藥物抑菌效價的一種方法。抑菌圈法操作便捷、簡單易行、成本低廉、結果準確可靠，是抑菌試驗的經(jīng)典方法，被廣泛使用。常用于抗生素產(chǎn)生菌的分離篩選。工具菌采用抗生素的敏感菌。若被檢菌能分泌某些抑制工具菌生長的物質，如抗生素等，便會在該菌落周圍形成工具菌不能生長的抑菌圈，很容易被鑒別出來。